分光光度计使用原理及操作方法

1、以水冷却回流加热反应反应2h，消解液自然冷却后，以试亚铁灵为指示剂，以硫酸亚铁铵溶液滴定剩余的重铬酸钾。

2、分光光度计的重要配件——比色杯

3、将灵敏度旋钮调置“1”档(放大倍率最小)。

4、六、把参比的溶液拉到光路中按住“OABS/100%T”键，这时的显示器会显示出BLANKING,，直到后显示出“100%T”或者是“0.000A”为止;

5、三、使用“方式”键测试的方式，再根据自己要测量的结果选透光率、吸光度、和浓度的测试;

6、分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光线透过测试的样品后，部分光线被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

7、分光光度计介绍：

8、在仪器尚未接通电源时，电表指针必须于“0”刻线上，若不是这种情况，则可以用电表上的校正螺丝进行调节。

9、预热后，按(4)连续几次调整“0”和“100%”，仪器即可进行测定工作。

10、接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热10分钟。

11、常用的波长范围：

12、有限公司工程师做如下绍：

13、比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。

14、分光光度计组成：主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。

15、（1）200～400nm的紫外光区

16、使用仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理。以及各个操作旋钮之功能。在未接通电源前，应该对仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固。通地要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再接通电源开关。仪器在使用前先检查一下，放大器暗盒的硅胶干燥筒(在仪器的左侧)，如受潮变色，应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶，烘干后再用。

17、浓度C的测量：选择开关由“A”旋置“C”，将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路，即可读出被测样品的浓度值。

18、分光光度定义：

19、在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向t=0处。

20、开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调至测试用波长。仪器预热20分钟。

21、分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。该仪器是食品厂、饮用水厂办理QS、HACCP认证的必备检验设备。

22、吸光度A的测量按(4)调整仪器的“00.0”和“100%”，将选择开关置于“A”，调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“.000”，然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度值。

23、八、分光光度计使用完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。

24、（3）2.5～25μm（按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>）的红外光区

25、将灵敏度开关调至“1”档(若零点调节器调不到“0”时，需选用较高档。)3.根据所需波长转动波长选择钮。　4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。　　5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向t=0处。　6.盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的t=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。　　7.比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。

26、四、要对波长进行分析，选择按键6，然后按提示依次进行;

27、盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的t=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。

28、将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。

29、分光光度法的实验原理是物质与光作用，具有选择吸收的特性。有色物质的颜色是该物质与光作用产生的。即有色溶液所呈现的颜色是由于溶液中的物质对光的选择性吸收所致。

30、使用本仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理，以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前，应该对仪器的安全性能进行检查，电源接线应牢固，通电也要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再按通电源开关。

31、将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时，需选用较）。

32、由于不同的物质其分子结构不同，对不同波长光的吸收能力也不同，因此具有特征结构的结构集团，存在选择吸收特性的最大实收波长，形成最大吸收峰，而产生特有的吸收光谱。即使是相同的物质由于其含量不同，对光的吸收程度也不同。

33、操作方法：

34、分光光度计注意事项：

35、分光光度计使用前，使用者应该首先了解分光光度计的结构和工作原理，以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前，应该对仪器的安全性能进行检查，电源接线应牢固，通电也要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再按通电源开关;

36、分光光度计的使用注意事项：

37、该仪器应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发亮不稳定。

38、根据所需波长转动波长选择钮。

39、分光光度计正确操作使用方法：

40、分光光度法利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质的存在（定性分析），或利用物质对一定波长光的吸收程度来测定物质含量（定量分析）。

41、所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。

42、如果大幅度改变测试波长时，在调整“0”和“100%”后稍等片刻，(因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间)，当稳定后，重新调整“0”和“100%”即可工作

43、七、后仪器显示出“100%T”或者是“0.000A”即可结束测试。这时被测样品的透光度、吸光度等参数就可直接读出;

44、如果显示不到“100.0”，则可适当增加微电流放大器的倍率档数，但尽可能置低倍率档使用，这样仪器将有更高的稳定性。但改变倍率后必须按(4)重新校正“0”和“100%”。

45、分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。

46、打开试样室盖(光门自动关闭)，调节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”，盖上试样室盖，将比色皿架置与蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示为“100.0”。

47、在分光光度计尚未接通电源时，电表指针必须于“0”刻线上，若不是这种情况，则可以用电表上的校正螺丝进行调节。

48、分光光度计操作方法：

49、分光光度计，又称光谱仪(spectrometer)，原理是将成分复杂的光，分解为光谱线。测量范围一般包括波长范围为380~780nm的可见光区和波长范围为200～380nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱，因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱：钨灯光源所发出的380～780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱；该色谱可作为可见光分光光度计的光源。

50、将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时，需选用较高档）。

51、比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积，有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不适合比色法测定。因为反应中的染料（如考马斯亮兰）能让石英和玻璃着色，所以必须采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。

52、测定原理为：在硫酸酸性介质中，以重铬酸钾为氧化剂，硫酸银为催化剂，硫酸汞为氯离子的掩蔽剂，消解反应液硫酸酸度为9mol/L，加热使消解反应液沸腾，148℃±2℃的沸点温度为消解温度。

53、分光光度计原理：

54、五、把样品溶液和要测定的溶液各自倒入比色皿中后，然后打开样品盖，把盛着溶液的比色皿插入另一个比色皿中，后盖好样品盖;

55、一、把分光光度计电源线连接好，仪器的电源具备接地功能;

56、（2）400～760nm的可见光区

57、二、接通电源后，按动开机开关，然后让仪器预热至少20分钟，仪器会自动校正，然后显示546.0nm0.000A说明自检结束，就可以开始测试;

58、分光光度法的实验原理是：　　1、光度法测定的条件：分光光度法测定物质含量时应注意的条件主要是显色反应的条件和测定吸光度的条件。显色反应的条件有显色剂的用量，介质的酸度、显色时温度、显色时间及干扰物质的消除方法等；测量吸光度的条件包括入射光波长的选择、吸光度范围和参比溶液等。　　2、二氮杂菲-亚铁络合物：邻二氮杂菲是测定微量铁的一种较好的试剂。在pH=2～9的条件下Fe2+离子与邻二氮杂菲生成稳定的橘红色络合物，此络合物的lgK稳=21.3,摩尔吸光系数ε510=1.1×104　　在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe3＋离子还原为Fe2＋离子，其反应式如下：　　2Fe3＋+2NH2OH·HCl→2Fe2＋+N2+2H2O+4H++2Cl-　　测定时，控制溶液酸度在pH=5左右较为适宜。酸度过高，反应进行较慢；酸度太低，则Fe2+离子水解，影响显色。　　Bi3+，Cd2+，Hg2+，Ag+，Zn2+等离子与显色剂生成沉淀，Ca2+，Cu2+，Ni2+等离子与显色剂形成有色络合物。因此当这些离子共存时，应注意它们的干扰作用。

59、分光光度计应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发亮不稳定;